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酶活检测试剂盒基于高度水溶性的四唑盐进行测定

发布时间: 2022-05-30  点击次数: 33次
  酶活检测试剂盒测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径10mm)、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
 
  基于高度水溶性的四唑盐进行测定。WST-8在电子介体的作用下可还原生成水溶性甲瓒产物,产生颜色反应。WST-8被细胞中的脱氢酶还原而生成橙色产物(甲瓒),可溶于组织培养基中。细胞中脱氢酶产生的甲瓒产物的量与活细胞的数量成正比。CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
 
  细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种,如台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、、ATP含量测定法、荧光染色法、比色法(MTT法)等。
 
  一些荧光染料对死细胞和活细胞有不同的作用效果,利用荧光显微镜检测细胞活性。如碘化丙锭(PI),被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜,因此活细胞不被染料染上色,只有死细胞或是凋亡细胞才能染上红色。
 
  吖啶橙(AO)能透过质膜完整的细胞,嵌入细胞DNA,使之发出明亮的绿色荧光。溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入DNA,发橘红色光。也可应用AO-EB双染法鉴定细胞活性。这种检测方法相比传统的染料,具有灵敏度高,操作简便,结果容易分辨等特点,而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。
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