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活性试剂盒使用注意事项

发布时间: 2022-06-22  点击次数: 7次
  活性试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
 
  活性试剂盒对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。
 
  细胞凋亡可通过两种起始途径启动,内始式途径由非受体刺激激活,如DNA损伤、内质网应激、代谢应激,线粒体外膜通透性改变,如细胞色素c释放,外源途径通过死亡受体与配体结合开始。
 
  对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。
 
  注意事项:
 
  1、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
 
  2、探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
 
  3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
 
  4、探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。
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