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活性试剂盒装载探针的相关使用说明

发布时间: 2022-01-19  点击次数: 199次
  活性试剂盒是一种利用荧光探针进行活性氧检测的试剂盒。本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
 
  活性试剂盒装载探针对于刺激时间较短,通常为2小时以内的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长,通常为6小时以上的细胞,先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。
 
  原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10μmol/L。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1mL。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20~30分钟后可以显著提高活性氧水平。
 
  收集细胞后装载探针:按照1∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10μmol/L。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中,细胞浓度为一百万至二千万/mL,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3~5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20~30分钟后可以显著提高活性氧水平。
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